第三章：实时荧光定量PCR的应用

一、相对定量测定不同样品中基因表达量的相对值

在进行基因表达的相对定量分析时，选择适合的内参基因是至关重要的。我们建议遵循以下原则：

1. 选择表达量稳定且均一的基因作为内参基因。
2. 避免盲目选择常用的内参基因。
3. 常用的内参基因包括GAPDH、Actin和Tublin。

内参基因的选择直接影响结果的有效性，因此在进行结果计算时需谨慎。

二、绝对定量

绝对定量是根据标准品确定样品中基因表达的绝对值（即拷贝数）。常用的标准品包括：

1. A/克隆质粒
2. B/PCR产物
3. C/cDNA（注意：用于扩增效率测定等用途，绝对定量时不适合使用）

在进行拷贝数计算时，可以通过以下公式来获取平均分子量（MW）：

• 对于双链DNA（dsDNA）：MW = (碱基数) x (660道尔顿/碱基)
• 对于单链DNA（ssDNA）：MW = (碱基数) x (330道尔顿/碱基)
• 对于单链RNA（ssRNA）：MW = (碱基数) x (340道尔顿/碱基)

拷贝数的计算公式为：

(6.02 x 10²³ 拷贝数/摩尔) x (浓度 g/ml) / (MW g/mol) =拷贝数/ml

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