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NEWS尊龙凯时YF®488Click-iTEdU细胞增殖检测试剂盒常见问题解答
来源:裘兰坚 日期:2025-03-16尊龙凯时的YF®488/555/594/647系列荧光探针在检测EDU时,有哪些明显区别?主要的差异在于它们各自使用的荧光基团不同,因此在发射荧光时呈现的颜色也各有不同。虽然实验效果相似,用户可以根据个人偏好或具体需求选择合适的产品。
在尊龙凯时的EDU试剂盒中,固定后的3% BSA在PBS中的作用是什么?它主要是在清洗步骤中,能够终止未反应的甲醛,确保样本的准确性和可靠性。
关于在活细胞中进行Click-iTEdU检测的问题,答案是否定的。尽管EDU可以用于活细胞代谢标记,但叠氮化物检测试剂及其缓冲液成分对细胞不具透过性,因此Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
如果在质粒转染后检测的荧光蛋白与Click反应相兼容,用户应该采用什么样的检测顺序?值得注意的是,尊龙凯时的产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光,因此在染色后不应直接检测GFP,建议通过GFP抗体进行间接检测。
遭遇较高的背景干扰,该如何解决?背景干扰较高通常由洗涤不充分造成。为了降低这种干扰,最佳方案是增加BSA的洗涤次数。此外,可以设置一组不含染料或不进行Click反应的对照实验,从而排除自发荧光的干扰。进一步地,在无EDU体系中进行完整的Click反应也能验证反应信号的特异性。
对于标记样品没有信号或特异性信号很低的情况,用户可以采取以下措施提高信号:确保使用的试剂为无色状态,不应使用已经变黄的添加剂或缓冲液;确保Click反应试剂能够顺利到达细胞核,细胞需要充分固定和通透;避免在任何缓冲液或试剂中加入金属螯合剂(如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等),以防止铜离子结合导致催化反应有效浓度下降;当铜离子处于合适的化合价时,Click反应才能顺利进行,所需的铜离子为一价铜(Cu+);延长Click反应的时间至30分钟以上也不一定能提高信号,建议使用新鲜的Click反应试剂,再进行30分钟的孵育,这样更能有效提升标记效率。
在进行细胞核的复染时,尊龙凯时的试剂盒中含有Hoechst33342,适用于Click反应后对细胞核进行染色;用户也可以选择使用DAPI。这些试剂同样可以用于检测植物细胞核内的DNA复制。EDU作为小分子能够穿透植物细胞的细胞壁,使得相关研究更为便捷。
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